人源TMEM173基因定点敲入小鼠模型

人源TMEM173基因定点敲入小鼠模型是一种基因工程动物模型，具体是指在小鼠的基因组中，通过CRISPR/Cas9等基因编辑技术，将人源的TMEM173基因精确地插入到小鼠对应的位置，以替换或添加该基因。TMEM173基因编码的STING蛋白（Stimulator of Interferon Genes）在机体的天然免疫反应中起着重要作用，与病毒感染、肿瘤发生及自身免疫疾病等相关。构建这种模型有助于科研人员深入研究该基因的功能、调控机制及其在相关疾病的发生发展中的作用，并为药物筛选和治疗策略提供重要的实验平台。

检测标准

人源TMEM173基因定点敲入小鼠模型的建立，主要标准应当参照以下几个方面：
1. **基因定点敲入准确性**：首先，需通过PCR、DNA测序等分子生物学手段验证TMEM173基因是否成功在预定位点被精确地敲入到小鼠基因组中，并且插入的人源基因序列正确无误。
2. **表达水平验证**：通过RT-PCR或qPCR检测小鼠组织中人源TMEM173基因的mRNA表达水平，确认其在相应组织和细胞中的表达与人类相似。
3. **蛋白表达验证**：利用Western blot或免疫组化等方法检测小鼠体内人源TMEM173蛋白的表达情况，确保其在翻译水平上的正常表达及功能区域的完整性。
4. **表型分析**：观察并分析敲入小鼠的生理、病理表型变化，看是否与人类相关疾病或生理状态相符，以进一步验证模型的有效性。
5. **功能验证**：通过一系列生化、细胞及动物实验，验证该人源TMEM173基因敲入小鼠模型能否重现人类疾病或生理过程的关键特征和功能。
6. **遗传稳定性**：需要评估该基因敲入在小鼠后代中的遗传稳定性，即连续几代小鼠中，人源TMEM173基因的定点敲入是否稳定遗传。
以上各点均满足要求，才能认为构建的人源TMEM173基因定点敲入小鼠模型是标准且有效的。

检测流程

构建人源TMEM173基因定点敲入小鼠模型的流程大致如下：
1. 设计sgRNA和供体DNA：首先，根据靶基因TMEM173的序列，利用CRISPR/Cas9系统设计特异性的sgRNA（单导向RNA），该sgRNA能够引导Cas9核酸酶在TMEM173基因的特定位置进行切割。同时，合成包含目标突变或插入序列的供体DNA。
2. 显微注射：将sgRNA、Cas9 mRNA以及供体DNA混合后，通过显微注射技术将其注入到小鼠受精卵的原核中。
3. 胚胎移植：将注射后的受精卵移植到代孕母鼠子宫内，使其继续发育为小鼠胚胎直至出生。
4. 子代筛选与验证：出生的小鼠后代经过PCR扩增及测序等方法，筛选出成功发生定点敲入的个体，即TMEM173基因定点敲入小鼠模型。
5. 表型分析与功能研究：对筛选得到的阳性小鼠进行表型观察和功能实验，以验证模型的有效性和可行性。
6. 模型稳定化：如果需要，可通过连续几代的回交或同源杂交，使敲入的基因稳定遗传。
以上步骤是基于CRISPR-Cas9基因编辑技术的基本流程，具体实施过程中可能还需结合实际情况进行调整优化。